荷電化粒子検出器（CAD）アプリケーション概要--
誘導体化せずに直接測定 17 アミノ酸

1、序文

アミノ酸分析はライフサイエンス研究において最も重要な技術の一つです。アミノ酸はヒトのタンパク質の基本成分です。いくつかの芳香族アミノ酸を除いて、 UV 吸収力が弱いです。直接使用 UV 検出器は検出感度が低く、干渉が大きいです。近年のペプチド創薬の研究では、アミノ酸組成分析（Amino Acid Composition Analysis、 AACA）は不可欠なコアリンクです。アミノ酸配列の検証など: ペプチド医薬品の生物活性は、そのアミノ酸配列と組成に大きく依存します。アミノ酸組成を分析することで、合成されたペプチドが標的配列と一致しているかどうかを検証し、合成エラー（アミノ酸の欠失、置換、予期せぬ修飾など）による機能不全を回避できます。アミノ酸構造の特性評価: 質量分析と組み合わせた (MS）およびクロマトグラフィー技術（例： HPLC-CAD）、アミノ酸組成分析は、複雑なポリペプチド（非天然アミノ酸や翻訳後修飾を含むポリペプチドなど）の分子構造を分析して、それらが設計要件を満たしていることを確認するのに役立ちます。

活用する荷電化粒子検出器（CAD）組み合わせる高速液体クロマトグラフィー（HPLC）(HPLC) 誘導体化を行わない直接検出用 17 アミノ酸、重要な技術的利点を実証します。従来の方法と比較して、この技術は煩雑な誘導体化ステップの必要性を排除し、誘導体化の不安定性によって引き起こされる感度の変動や定量的偏差を回避します。試薬、副反応、または製品の多様性。CAD 検出器の普遍的な原理により、不揮発性および微弱な物質に対して高感度で応答することができます。 UV- 化合物（アミノ酸など）を吸収し、特定の官能基修飾に依存せずに正確な検出を可能にします。この方法により、前処理プロセスが簡素化され、分析時間が短縮され、有毒物質の使用が削減されます。試薬、これはグリーンケミストリーの概念と一致しています。さらに、その広いダイナミックレンジと良好な線形関係により、複雑なマトリックス（体液や食品など）中の複数のアミノ酸の同時定量分析がサポートされます。試料s) であり、ハイスループットの研究室での迅速なスクリーニングと品質管理に特に適しています。研究により、このメソッドは保持時間の安定性、再現性、回収の点で良好に機能し、ライフサイエンス、臨床診断、食品産業に効率的で信頼性の高い分析ソリューションを提供することが確認されています。

この記事では逆相を利用しています。 HPLC 組み合わせる INSTRUMAX の荷電化粒子検出器（CAD）直接測定 17 この方法は高速、シンプル、正確、高感度、再現性があり、直線的であり、アミノ酸検出とペプチド創薬研究に強力な技術サポートを提供します。

2、装置と材料

装置:Agilent1200 液体クロマトグラフ

CAD 検出器(INSTRUMAX、モデル: CADetector a1）

試薬：純水（ワトソン蒸留水）、

アセトニトリル (クロマトグラフィー的に純粋)、

トリフルオロ酢酸（分析グレード）

ヘプタフルオロ酪酸（分析グレード）

試料: 塩酸溶液中 17 アミノ酸混合溶液標準物質（微量測定標準物質）

3、方法と結果

3.1 クロマトグラフィー条件

カラム:ZORBAX SB-C18 3.5μm 4.6*250mm

流量:0.8mL/min

移動相答え：水（0.7%トリフルオロ酢酸+5mm ol/L ヘプタフルオロ酪酸) 移動相 B：アセトニトリル

グラジエント溶出

シンナー：水

CAD 条件:

装置モデル:INSTRUMAX CADetector a1

ドリフトチューブ温度:35℃

霧化された空気の流れ:3L/min

コロナ気流:1L/min

コロナの流れ：1μA

ゲイン:0.05

RF：2.0

3.2 実験結果

3.2.1 17 アミノ酸の分離: この方法では 17 アミノ酸がよく分離されており、隣接する成分も効果的に分離できます。各アミノ酸のピーク形状はシャープであり、カラム効率が高いです。

3.2.2 100pmol の試料信号対雑音比は良好です (ソフトウェア P2P 自動的に計算される方法）。

3.2.3 射出精度、1mm オール/L規格試料-注射 5μL、連続噴射 6 針、各アミノ酸 RSD％の方が良いです。

3.2.4 リニア

注入する 1μL、2μL、5μL、10μL そして 20μL、注入量とピーク面積を使用して線形方程式を作成します。

直線性が良く、各成分の相関係数Rが 0.999.

要約表は次のとおりです。

シリアル番号	成分	一次方程式	相関係数R
1	グリシン (Cly)	y=18.4029x-2.4676	0.99997
2	セリン(Ser)	y=20.6894x-2.1976	0.99997
3	アスパラギン酸 (Asp)	y=19.6119x+0.7603	0.99992
4	アラニン (Ala)	y=23.0974x+4.0342	0.99963
5	スレオニン (Thr)	y=24.4949x+3.2034	0.99963
6	グルタミン酸（Glu）	y=24.7983x+3.3148	0.99963
7	シスチン(Cys)	y=40.0386x+6.0799	0.99968
8	リジン(Lys)	y=45.3407x+9.2496	0.99967
9	ヒスチジン (His)	y=34.6789x+11.3921	0.99942
10	アルギニン(Arg)	y=55.8643x+6.4591	0.99996
11	プロリン(プロ)	y=70.7237x+20.7902	0.99945
12	バリン（ヴァル）	y=51.4909x+7.5024	0.99964
13	メチオニン(Met)	y=58.4620x-13.7992	0.99981
14	チロシン (Tyr)	y=64.1751x+25.8099	0.99912
15	イソロイシン (Ile)	y=76.4371x+13.1955	0.99978
16	ロイシン（ロイシン）	y=81.4997x+14.6637	0.99975
17	フェニルアラニン (Phe)	y=89.0247x+22.3171	0.99951

4、結論

この研究では、 HPLC-CAD この方法はアミノ酸を決定するために使用されます。の試料誘導体化せずに直接注入して分析できます。誘導体化によるエラーを回避するための面倒な前処理は必要ありません。誘導体化条件をスクリーニングする必要はありません（誘導体化試薬、反応条件など）を考慮し、測定誤差を軽減します。操作はより簡単になり、結果は正確で信頼性が高く、強力な結果が得られます。装置アミノ酸の決定のためのメソッドのサポート。