荷電化粒子検出器（CAD）
アプリケーションノート

1. はじめに

アミノ酸分析は生命科学研究で最も重要な技術の一つです。アミノ酸はタンパク質の基本構成成分ですが、一部の芳香族アミノ酸を除き、多くは UV 吸収が弱いため、UV 検出だけでは感度不足や干渉が問題になります。

ペプチド医薬品研究では、アミノ酸組成分析（AACA）が中核的な工程です。AACA は配列確認を支援し、質量分析（MS）や HPLC-CAD などのクロマトグラフィーと組み合わせることで、非天然アミノ酸や翻訳後修飾を含む複雑なペプチドの構造解析にも役立ちます。

本アプリケーションでは、逆相 HPLC と Instrumax の荷電化粒子検出器（CAD）、モデル CADetector a1 を用い、17 種アミノ酸を誘導体化せずに直接測定します。迅速、簡便、正確で、高感度、良好な再現性、優れた直線性を示します。

2. 装置および材料

装置：Agilent 1200 液体クロマトグラフ。

検出器：Instrumax CADetector a1 荷電化粒子検出器（CAD）。

試薬：精製水（Watson 蒸留水）、アセトニトリル（クロマトグラフィーグレード）、トリフルオロ酢酸（分析グレード）、ヘプタフルオロ酪酸（分析グレード）。

試料：塩酸溶液中の 17 種アミノ酸混合標準物質。

3. 方法および結果

3.1 クロマトグラフィー条件

カラム：ZORBAX SB-C18、3.5 μm、4.6 × 250 mm。流量：0.8 mL/min。

移動相 A：0.7% トリフルオロ酢酸および 5 mmol/L ヘプタフルオロ酪酸を含む水。移動相 B：アセトニトリル。希釈液：水。

CAD 条件：CADetector a1、ドリフトチューブ温度 35 °C、噴霧ガス流量 3 L/min、コロナガス流量 1 L/min、コロナ電流 1 μA、ゲイン 0.05、RF 2.0。

3.2 実験結果

3.2.1 17 種アミノ酸の分離

この条件では 17 種アミノ酸が良好に分離されました。隣接成分は有効に分離され、ピーク形状は鋭く、カラム効率も高い結果でした。

3.2.2 100 pmol の S/N

100 pmol アミノ酸試料は良好な S/N を示しました。S/N はソフトウェアの P2P 方式で自動計算されました。

3.2.3 注入精密度

1 mmol/L 標準液を 5 μL で 6 回連続注入しました。各アミノ酸の RSD% は良好でした。

3.2.4 直線性

1 μL、2 μL、5 μL、10 μL、20 μL の注入量を用い、注入量とピーク面積から線形式を作成しました。直線性は良好で、すべての成分の相関係数 R は 0.999 を超えました。

直線性まとめ

4. 結論

本 HPLC-CAD 法では、アミノ酸を誘導体化せずに直接測定できます。煩雑な前処理を不要にし、誘導体化条件や試薬に起因する誤差を避け、操作を簡便化しながら、アミノ酸測定およびペプチド医薬品研究に正確で信頼性の高い結果を提供します。