电雾式检测器（CAD）应用简报--
非衍生方式直接测定 17 种氨基酸

1、前言

氨基酸分析是生命科学研究中最重要的技术之一。氨基酸是人体蛋白质的基本组成物质，除个别芳香族氨基酸外，紫外吸收均较弱，直接使用紫外检测器检测灵敏度低、干扰大。而在在近年来的多肽药物研究中，氨基酸组成分析（Amino Acid Composition Analysis, AACA）是不可或缺的核心环节。如氨基酸序列验证：多肽药物的生物活性高度依赖于其氨基酸序列及组成。通过分析氨基酸组成，可验证合成多肽是否与目标序列一致，避免因合成错误（如氨基酸缺失、置换或非预期修饰）导致的功能失效；氨基酸结构表征：结合质谱（MS）和色谱技术（如 HPLC-CAD），氨基酸组成分析可辅助解析复杂多肽（如含非天然氨基酸或翻译后修饰的多肽）的分子结构，确保其符合设计要求。

利用电喷雾检测器（CAD）结合高效液相色谱（HPLC）进行非衍生化直接检测 17 种氨基酸，展现了显著的技术优势。相较于传统方法，该技术省去了繁琐的衍生化步骤，避免了因衍生试剂不稳定、副反应或产物多样性导致的灵敏度波动和定量偏差。CAD 检测器的通用性原理使其对非挥发性和弱紫外吸收化合物（如氨基酸）具有高灵敏度响应，无需依赖特定官能团修饰即可实现精准检测。此方法简化了前处理流程，缩短了分析时间，同时减少了有毒试剂的使用，符合绿色化学理念。此外，其宽动态范围和良好的线性关系支持复杂基质（如生物体液、食品样品）中多种氨基酸的同时定量分析，尤其适用于高通量实验室的快速筛查与质量控制。研究证实，该方法在保留时间稳定性、重复性和回收率方面表现优异，为生命科学、临床诊断及食品工业提供了高效可靠的分析解决方案。

本文利用使用反相 HPLC 结合英迈仪器的电雾式检测器（CAD）直接测定 17 种氨基酸，该方法快速、简便、准确，灵敏度高，重复性好，线性佳，为氨基酸检测及多肽药物研究提供了有力的技术支撑。

2、仪器和材料

仪器：Agilent1200 液相色谱仪

CAD 检测器（英迈仪器，型号：CADetector a1）

试剂：纯水（屈臣氏蒸馏水），

乙腈（色谱纯），

三氟乙酸（分析纯）

七氟丁酸（分析纯）

样品：盐酸溶液中 17 种氨基酸混合溶液标准物质（伟业计量标准物质）

3、方法与结果

3.1 色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18 3.5μm 4.6*250mm

流速：0.8mL/min

流动相 A：水（0.7%三氟乙酸+5mmol/L 七氟丁酸）　流动相 B：乙腈

梯度洗脱

稀释剂：水

CAD 条件：

仪器型号：英迈仪器 CADetector a1

漂移管温度：35℃

雾化气流：3L/min

电晕气流：1L/min

电晕电流：1μA

增益：0.05

RF：2.0

3.2 实验结果

3.2.1 17 种氨基酸分离情况：此方法下 17 种氨基酸分离良好，相邻组分均能有效分离，各氨基酸峰形尖锐，柱效高。

3.2.2 100pmol 样品信噪比良好（软件 P2P 方式自动计算）。

3.2.3 进样精密度，1mmol/L 标样-进样 5μL，连续进样 6 针，各氨基酸 RSD%均较好。

3.2.4 线性

进样 1μL，2μL，5μL，10μL 和 20μL，使用进样体积与峰面积做线性方程。

线性良好，各个组分的相关系数 R 均大于 0.999。

总结表格如下：

4、结论

本研究采用 HPLC-CAD 法测定氨基酸，样品无需衍生化可直接进样分析，不需要繁琐的前处理，避免由于衍生化产生的误差，无需筛选衍生条件（衍生试剂、反应条件等），减小了测定误差；操作更加简便，结果准确、可靠，为氨基酸的测定提供了有力的仪器及方法支撑。