Charged-Aerosol-Detektor (CAD) Bewerbungsunterlagen--
Direkte Messung ohne Derivatisierung 17 Aminosäuren

1, Vorwort

Die Aminosäureanalyse ist eine der wichtigsten Technologien in der Life-Science-Forschung. Aminosäuren sind die Grundbestandteile des menschlichen Proteins. Mit Ausnahme einiger aromatischer Aminosäuren sind ihre UV Die Absorption ist schwach. Direkte Nutzung von UV Detektoren weisen eine geringe Erkennungsempfindlichkeit und hohe Interferenzen auf. In den letzten Jahren der Peptidarzneimittelforschung wurde die Analyse der Aminosäurezusammensetzung (Aminosäurezusammensetzungsanalyse, AACA) ist ein unverzichtbarer Kernlink. Wie zum Beispiel die Überprüfung der Aminosäuresequenz: Die biologische Aktivität von Peptidarzneimitteln hängt stark von ihrer Aminosäuresequenz und -zusammensetzung ab. Durch die Analyse der Aminosäurezusammensetzung kann überprüft werden, ob das synthetisierte Peptid mit der Zielsequenz übereinstimmt, und Funktionsausfälle durch Synthesefehler (z. B. Aminosäuredeletionen, -substitutionen oder unerwartete Modifikationen) vermieden werden. Charakterisierung der Aminosäurestruktur: kombiniert mit Massenspektrometrie (MS) und chromatographische Techniken (z. B. HPLC-CAD) kann die Analyse der Aminosäurezusammensetzung bei der Analyse der molekularen Struktur komplexer Polypeptide (z. B. Polypeptide, die unnatürliche Aminosäuren oder posttranslationale Modifikationen enthalten) hilfreich sein, um sicherzustellen, dass sie den Designanforderungen entsprechen.

ausnutzen Charged-Aerosol-Detektor (CAD) kombinieren Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC)(HPLC) für den direkten Nachweis ohne Derivatisierung 17 Aminosäuren, was erhebliche technische Vorteile aufweist. Im Vergleich zu herkömmlichen Methoden macht diese Technologie umständliche Derivatisierungsschritte überflüssig und vermeidet Empfindlichkeitsschwankungen und quantitative Abweichungen, die durch Instabilität der Derivatisierung verursacht werden Reagenzien, Nebenreaktionen oder Produktvielfalt.CAD Das universelle Prinzip des Detektors ermöglicht es ihm, mit hoher Empfindlichkeit auf nichtflüchtige und schwache Signale zu reagieren UV-absorbierende Verbindungen (z. B. Aminosäuren), was eine genaue Erkennung ermöglicht, ohne auf spezifische Modifikationen funktioneller Gruppen angewiesen zu sein. Diese Methode vereinfacht den Vorbehandlungsprozess, verkürzt die Analysezeit und reduziert den Einsatz toxischer Substanzen Reagenzien, was dem Konzept der grünen Chemie entspricht. Darüber hinaus unterstützen sein großer Dynamikbereich und seine gute lineare Beziehung die gleichzeitige quantitative Analyse mehrerer Aminosäuren in komplexen Matrizen (wie biologischen Flüssigkeiten und Lebensmitteln). Probe s) und eignet sich besonders für schnelles Screening und Qualitätskontrolle in Hochdurchsatzlaboren. Untersuchungen haben bestätigt, dass diese Methode in Bezug auf Retentionszeitstabilität, Wiederholbarkeit und Wiederfindung eine gute Leistung erbringt und eine effiziente und zuverlässige Analyselösung für Biowissenschaften, klinische Diagnostik und die Lebensmittelindustrie bietet.

In diesem Artikel wird die Umkehrphase verwendet HPLC kombinieren INSTRUMAX von Charged-Aerosol-Detektor (CAD) direkte Messung 17 Diese Methode ist schnell, einfach, genau, hochempfindlich, reproduzierbar und linear und bietet eine starke technische Unterstützung für den Aminosäurenachweis und die Peptid-Arzneimittelforschung.

2, Instrumente und Materialien

Instrumente:Agilent1200 Flüssigchromatograph

CAD Detektor(INSTRUMAX, Modell: CADetector a1)

Reagenzien: reines Wasser (Watson's destilliertes Wasser),

Acetonitril (chromatographisch rein),

Trifluoressigsäure (analytische Qualität)

Heptafluorbuttersäure (analytische Qualität)

Probe: in Salzsäurelösung 17 Standardmaterial für gemischte Aminosäurelösungen (Weiye-Messstandardmaterial)

3, Methoden und Ergebnisse

3.1 Chromatographische Bedingungen

Säule:ZORBAX SB-C18 3.5μm 4.6*250mm

Flussrate:0.8mL/min

Mobile Phase A: Wasser (0.7%Trifluoressigsäure+5mm ol/L Heptafluorbuttersäure) Mobile Phase B: Acetonitril

Gradientenelution

Verdünner: Wasser

CAD Bedingungen:

Instrument Modell:INSTRUMAX CADetector a1

Driftrohrtemperatur:35℃

Zerstäubter Luftstrom:3L/min

Corona-Luftstrom:1L/min

Corona aktuell:1μA

Gewinn:0.05

RF::2.0

3.2 Versuchsergebnisse

3.2.1 17 Trennung von Aminosäuren: nach dieser Methode 17 Die Aminosäuren werden gut getrennt und benachbarte Komponenten können effektiv getrennt werden. Die Peakformen jeder Aminosäure sind scharf und die Säule Die Effizienz ist hoch.

3.2.2 100pmol Die Probe Signal-Rausch-Verhältnis ist gut (Software P2P Methode automatisch berechnet).

3.2.3 Einspritzpräzision,1mm ol/L-Standard Probe-Injektion 5μL, kontinuierliche Injektion 6 Nadel, jede Aminosäure RSD% sind besser.

3.2.4 Linear

Spritzen 1μL,2μL,5μL,10μL und 20μL Verwenden Sie das Injektionsvolumen und die Peakfläche, um eine lineare Gleichung zu erstellen.

Die Linearität ist gut und der Korrelationskoeffizient R jeder Komponente ist größer als 0.999.

Die Übersichtstabelle lautet wie folgt:

4, Fazit

Diese Studie verwendet HPLC-CAD Die Methode dient zur Bestimmung von Aminosäuren. Die Probe kann ohne Derivatisierung direkt injiziert und analysiert werden. Es ist keine umständliche Vorverarbeitung erforderlich, um durch die Derivatisierung verursachte Fehler zu vermeiden. Es besteht keine Notwendigkeit, die Derivatisierungsbedingungen zu überprüfen (Derivatisierung). Reagenzien, Reaktionsbedingungen usw.), wodurch Messfehler reduziert werden. Die Bedienung ist einfacher, die Ergebnisse sind genau und zuverlässig und es liefert starke Ergebnisse Instrument und Methodenunterstützung für die Bestimmung von Aminosäuren.