Charged-Aerosol-Detektor (CAD)
Anwendungsnotiz

1. Einleitung

Die Aminosäureanalyse gehört zu den wichtigsten Techniken in der Life-Science-Forschung. Aminosäuren sind grundlegende Bausteine von Proteinen; mit Ausnahme einiger aromatischer Aminosäuren absorbieren die meisten nur schwach im UV-Bereich. Direkte UV-Detektion kann daher geringe Empfindlichkeit und starke Interferenzen zeigen.

In der Peptidwirkstoff-Forschung ist die Aminosäurezusammensetzungsanalyse (AACA) ein zentraler Schritt. In Kombination mit Massenspektrometrie (MS) und chromatographischen Techniken wie HPLC-CAD unterstützt sie die Sequenzprüfung und die Strukturaufklärung komplexer Peptide, einschließlich Peptiden mit unnatürlichen Aminosäuren oder posttranslationalen Modifikationen.

Diese Anwendung nutzt Umkehrphasen-HPLC mit dem Instrumax Charged-Aerosol-Detektor (CAD), Modell CADetector a1, zur direkten Bestimmung von 17 Aminosäuren ohne Derivatisierung. Die Methode ist schnell, einfach, genau, empfindlich, wiederholbar und linear.

2. Instrumente und Materialien

Instrument: Agilent 1200 Flüssigkeitschromatograph.

Detektor: Instrumax CADetector a1 Charged-Aerosol-Detektor (CAD).

Reagenzien: gereinigtes Wasser (Watson destilliertes Wasser), Acetonitril (Chromatographiequalität), Trifluoressigsäure (Analysequalität) und Heptafluorbuttersäure (Analysequalität).

Probe: zertifizierte gemischte Standardlösung von 17 Aminosäuren in Salzsäure.

3. Methoden und Ergebnisse

3.1 Chromatographische Bedingungen

Säule: ZORBAX SB-C18, 3,5 μm, 4,6 × 250 mm. Flussrate: 0,8 mL/min.

Mobile Phase A: Wasser mit 0,7 % TFA und 5 mmol/L Heptafluorbuttersäure. Mobile Phase B: Acetonitril. Verdünnungsmittel: Wasser.

CAD-Bedingungen: CADetector a1; Driftrohrtemperatur 35 °C; Zerstäubergas 3 L/min; Koronagas 1 L/min; Koronastrom 1 μA; Gain 0,05; RF 2,0.

3.2 Versuchsergebnisse

3.2.1 Trennung der 17 Aminosäuren

Unter diesen Bedingungen wurden die 17 Aminosäuren gut getrennt. Benachbarte Komponenten wurden wirksam aufgelöst, die Peaks waren scharf, und die Säuleneffizienz war hoch.

3.2.2 Signal-Rausch-Verhältnis bei 100 pmol

Die 100-pmol-Aminosäureprobe zeigte ein gutes Signal-Rausch-Verhältnis, das von der Software automatisch mit der P2P-Methode berechnet wurde.

3.2.3 Injektionspräzision

Eine 1 mmol/L-Standardlösung wurde sechsmal hintereinander mit 5 μL injiziert. Die RSD%-Werte aller Aminosäuren waren gut.

3.2.4 Linearität

Es wurden Injektionsvolumina von 1 μL, 2 μL, 5 μL, 10 μL und 20 μL verwendet. Die linearen Gleichungen wurden aus Injektionsvolumen und Peakfläche berechnet. Die Linearität war ausgezeichnet, und alle Korrelationskoeffizienten R lagen über 0,999.

Linearitätsübersicht

4. Fazit

Diese HPLC-CAD-Methode bestimmt Aminosäuren direkt ohne Derivatisierung. Sie vermeidet aufwendige Probenvorbereitung, reduziert Fehler durch Derivatisierungsbedingungen oder Reagenzien, vereinfacht die Bedienung und liefert genaue, zuverlässige Ergebnisse für Aminosäurebestimmung und Peptidwirkstoff-Forschung.