détecteur d’aérosols chargés (CAD) Dossier de candidature--
Mesure directe sans dérivatisation 17 acides aminés

1, Préface

L'analyse des acides aminés est l'une des technologies les plus importantes dans la recherche en sciences de la vie. Les acides aminés sont les composants de base des protéines humaines. À l'exception de quelques acides aminés aromatiques, leur UV l'absorption est faible. Utilisation directe de UV Les détecteurs ont une faible sensibilité de détection et des interférences élevées. Au cours des dernières années de recherche sur les médicaments peptidiques, l'analyse de la composition en acides aminés (Analyse de la composition des acides aminés, AACA) est un maillon essentiel indispensable. Comme la vérification de la séquence d’acides aminés : l’activité biologique des médicaments peptidiques dépend fortement de sa séquence et de sa composition d’acides aminés. En analysant la composition en acides aminés, il peut être vérifié si le peptide synthétisé est cohérent avec la séquence cible et éviter les échecs fonctionnels causés par des erreurs de synthèse (telles que des délétions, des substitutions ou des modifications inattendues d'acides aminés) ; Caractérisation de la structure des acides aminés : combinée à la spectrométrie de masse (MS) et les techniques chromatographiques (par ex. HPLC-CAD), l'analyse de la composition en acides aminés peut aider à analyser la structure moléculaire de polypeptides complexes (tels que des polypeptides contenant des acides aminés non naturels ou des modifications post-traductionnelles) pour garantir qu'ils répondent aux exigences de conception.

profiter de détecteur d’aérosols chargés (CAD) combiner chromatographie liquide haute performance (HPLC)(HPLC) pour une détection directe sans dérivatisation 17 acides aminés, démontrant des avantages techniques significatifs. Par rapport aux méthodes traditionnelles, cette technologie élimine le besoin d'étapes de dérivatisation fastidieuses et évite les fluctuations de sensibilité et les écarts quantitatifs causés par l'instabilité de la dérivatisation. Réactifs, les réactions secondaires ou la diversité des produits.CAD Le principe universel du détecteur lui permet de répondre avec une sensibilité élevée aux signaux non volatils et faibles. UV-des composés absorbants (tels que les acides aminés), permettant une détection précise sans recourir à des modifications de groupes fonctionnels spécifiques. Cette méthode simplifie le processus de prétraitement, raccourcit le temps d'analyse et réduit l'utilisation de produits toxiques. Réactifs, ce qui s’inscrit dans le concept de chimie verte. De plus, sa large plage dynamique et sa bonne relation linéaire permettent l'analyse quantitative simultanée de plusieurs acides aminés dans des matrices complexes (telles que les fluides biologiques et les aliments). Échantillon s), et convient particulièrement au dépistage rapide et au contrôle qualité dans les laboratoires à haut débit. La recherche a confirmé que cette méthode fonctionne bien en termes de stabilité du temps de rétention, de répétabilité et de récupération, fournissant ainsi une solution analytique efficace et fiable pour les sciences de la vie, les diagnostics cliniques et l'industrie alimentaire.

Cet article utilise l'utilisation de la phase inverse HPLC combiner INSTRUMAX de détecteur d’aérosols chargés (CAD) mesure directe 17 Cette méthode est rapide, simple, précise, hautement sensible, reproductible et linéaire, offrant un solide support technique pour la détection des acides aminés et la recherche de médicaments peptidiques.

2, Instruments et matériaux

Instruments:Agilent1200 chromatographe liquide

CAD détecteur (INSTRUMAX, Modèle : CADetector a1)

Réactifs: eau pure (eau distillée de Watson),

Acétonitrile (chromatographiquement pur),

Acide trifluoroacétique (qualité analytique)

Acide heptafluorobutyrique (qualité analytique)

Échantillon: en solution d'acide chlorhydrique 17 Matériau étalon de solution mélangée d'acides aminés (matériau étalon de mesure Weiye)

3, méthodes et résultats

3.1 Conditions chromatographiques

Colonne:ZORBAX SB-C18 3.5μm 4.6*250mm

Débit:0.8mL/min

Phase mobile A : eau (0.7%Acide trifluoroacétique+5mm ol/L acide heptafluorobutyrique) Phase mobile B : acétonitrile

élution par gradient

Diluant : eau

CAD Conditions :

Instrument modèle :INSTRUMAX CADetector a1

Température du tube de dérive :35℃

Débit d'air atomisé :3L/min

Flux d'air corona :1L/min

Courant corona :1μA

Gain :0.05

RF：2.0

3.2 Résultats expérimentaux

3.2.1 17 Séparation des acides aminés : selon cette méthode 17 Les acides aminés sont bien séparés et les composants adjacents peuvent être efficacement séparés. Les formes des pics de chaque acide aminé sont nettes et les Colonne l'efficacité est élevée.

3.2.2 100pmol Le Échantillon le rapport signal/bruit est bon (logiciel P2P méthode calculée automatiquement).

3.2.3 Précision d'injection,1mm étalon ol/L Échantillon-injection 5μL, injection continue 6 aiguille, chaque acide aminé RSD% sont meilleurs.

3.2.4 Linéaire

Injecter 1μL,2μL,5μL,10μL et 20μL, utilisez le volume d'injection et la surface du pic pour créer une équation linéaire.

La linéarité est bonne et le coefficient de corrélation R de chaque composante est supérieur à 0.999.

Le tableau récapitulatif est le suivant :

4, conclusion

Cette étude utilise HPLC-CAD La méthode est utilisée pour déterminer les acides aminés. Le Échantillon peut être directement injecté et analysé sans dérivatisation. Il ne nécessite pas de prétraitement fastidieux pour éviter les erreurs causées par la dérivatisation. Il n'est pas nécessaire d'examiner les conditions de dérivatisation (la dérivatisation Réactifs, conditions de réaction, etc.), ce qui réduit les erreurs de mesure. L'opération est plus simple, les résultats sont précis et fiables, et elle fournit une forte Instrument et support de méthode pour la détermination des acides aminés.