Détecteur d’aérosols chargés (CAD)
Note d’application

1. Introduction

L’analyse des acides aminés est l’une des techniques essentielles en sciences de la vie. Les acides aminés sont les constituants de base des protéines ; à l’exception de quelques acides aminés aromatiques, la plupart absorbent faiblement dans l’UV. La détection UV directe peut donc manquer de sensibilité et subir de fortes interférences.

Dans la recherche sur les médicaments peptidiques, l’analyse de composition en acides aminés (AACA) est une étape clé. Combinée à la spectrométrie de masse (MS) et à des techniques chromatographiques telles que HPLC-CAD, elle aide à vérifier les séquences et à caractériser des peptides complexes, y compris ceux contenant des acides aminés non naturels ou des modifications post-traductionnelles.

Cette application utilise la HPLC en phase inverse avec le détecteur d’aérosols chargés (CAD) Instrumax, modèle CADetector a1, pour déterminer directement 17 acides aminés sans dérivatisation. La méthode est rapide, simple, précise, sensible, répétable et linéaire.

2. Instruments et matériaux

Instrument : chromatographe liquide Agilent 1200.

Détecteur : détecteur d’aérosols chargés Instrumax CADetector a1 (CAD).

Réactifs : eau purifiée (eau distillée Watson), acétonitrile (qualité chromatographique), acide trifluoroacétique (qualité analytique) et acide heptafluorobutyrique (qualité analytique).

Échantillon : solution étalon mixte certifiée de 17 acides aminés dans l’acide chlorhydrique.

3. Méthodes et résultats

3.1 Conditions chromatographiques

Colonne : ZORBAX SB-C18, 3,5 μm, 4,6 × 250 mm. Débit : 0,8 mL/min.

Phase mobile A : eau contenant 0,7 % de TFA et 5 mmol/L d’acide heptafluorobutyrique. Phase mobile B : acétonitrile. Diluant : eau.

Conditions CAD : CADetector a1 ; tube de dérive 35 °C ; gaz de nébulisation 3 L/min ; gaz corona 1 L/min ; courant corona 1 μA ; gain 0,05 ; RF 2,0.

3.2 Résultats expérimentaux

3.2.1 Séparation des 17 acides aminés

Dans ces conditions, les 17 acides aminés ont été bien séparés. Les composés adjacents ont été résolus efficacement, les pics étaient nets et l’efficacité de colonne était élevée.

3.2.2 Rapport signal/bruit à 100 pmol

L’échantillon d’acides aminés à 100 pmol a présenté un bon rapport signal/bruit, calculé automatiquement par le logiciel selon la méthode P2P.

3.2.3 Précision d’injection

Une solution étalon à 1 mmol/L a été injectée six fois consécutivement à 5 μL. Les valeurs de RSD% de tous les acides aminés étaient bonnes.

3.2.4 Linéarité

Des volumes d’injection de 1 μL, 2 μL, 5 μL, 10 μL et 20 μL ont été utilisés. Les équations linéaires ont été calculées à partir du volume d’injection et de l’aire de pic. La linéarité était excellente et tous les coefficients de corrélation R étaient supérieurs à 0,999.

Résumé de linéarité

4. Conclusion

Cette méthode HPLC-CAD détermine directement les acides aminés sans dérivatisation. Elle supprime un prétraitement complexe, évite les erreurs dues aux conditions ou aux réactifs de dérivatisation, simplifie l’opération et fournit des résultats précis et fiables pour la détermination des acides aminés et la recherche sur les médicaments peptidiques.