하전 에어로졸 검출기(CAD)
애플리케이션 노트

1. 서론

아미노산 분석은 생명과학 연구에서 가장 중요한 기술 중 하나입니다. 아미노산은 단백질의 기본 구성 성분이며, 일부 방향족 아미노산을 제외하면 대부분 UV 흡수가 약합니다. 따라서 UV 검출만 사용할 경우 감도 부족과 강한 간섭이 발생할 수 있습니다.

펩타이드 의약품 연구에서 아미노산 조성 분석(AACA)은 핵심 단계입니다. AACA는 서열 확인을 지원하며, 질량분석(MS) 및 HPLC-CAD와 같은 크로마토그래피와 결합하면 비천연 아미노산이나 번역 후 변형을 포함한 복잡한 펩타이드의 구조 특성 분석에도 도움이 됩니다.

이 응용은 역상 HPLC와 Instrumax 하전 에어로졸 검출기(CAD), 모델 CADetector a1을 사용해 17종 아미노산을 유도체화 없이 직접 측정합니다. 이 방법은 빠르고 간단하며 정확하고 감도가 높으며 반복성과 선형성이 우수합니다.

2. 기기 및 재료

기기: Agilent 1200 액체 크로마토그래프.

검출기: Instrumax CADetector a1 하전 에어로졸 검출기(CAD).

시약: 정제수(Watson 증류수), 아세토니트릴(크로마토그래피 등급), 트리플루오로아세트산(분석 등급), 헵타플루오로부티르산(분석 등급).

시료: 염산 용액 중 17종 아미노산 혼합 인증 표준물질.

3. 방법 및 결과

3.1 크로마토그래피 조건

컬럼: ZORBAX SB-C18, 3.5 μm, 4.6 × 250 mm. 유속: 0.8 mL/min.

이동상 A: 0.7% TFA와 5 mmol/L 헵타플루오로부티르산을 포함한 물. 이동상 B: 아세토니트릴. 희석액: 물.

CAD 조건: CADetector a1; 드리프트 튜브 온도 35 °C; 분무 가스 3 L/min; 코로나 가스 1 L/min; 코로나 전류 1 μA; 게인 0.05; RF 2.0.

3.2 실험 결과

3.2.1 17종 아미노산 분리

이 조건에서 17종 아미노산은 잘 분리되었습니다. 인접 성분이 효과적으로 분리되었고 피크 모양은 날카로웠으며 컬럼 효율도 높았습니다.

3.2.2 100 pmol 신호대잡음비

100 pmol 아미노산 시료는 양호한 신호대잡음비를 보였으며, 소프트웨어가 P2P 방식으로 자동 계산했습니다.

3.2.3 주입 정밀도

1 mmol/L 표준액을 5 μL로 6회 연속 주입했습니다. 각 아미노산의 RSD%는 양호했습니다.

3.2.4 선형성

1 μL, 2 μL, 5 μL, 10 μL, 20 μL의 주입량을 사용했습니다. 주입량과 피크 면적으로 선형 방정식을 계산했습니다. 선형성은 우수했으며 모든 성분의 상관계수 R은 0.999를 초과했습니다.

선형성 요약

4. 결론

이 HPLC-CAD 방법은 아미노산을 유도체화 없이 직접 측정합니다. 복잡한 전처리를 없애고 유도체화 조건이나 시약으로 인한 오류를 피하며 조작을 단순화하면서, 아미노산 분석 및 펩타이드 의약품 연구에 정확하고 신뢰할 수 있는 결과를 제공합니다.