Rapport d’essai HPLC-CAD d’un échantillon de pipéridine

1. Instruments et matériaux

Instrument : chromatographe liquide Agilent 1200 avec détecteur d’aérosols chargés Instrumax CADetector a1 (CAD).

Réactifs : eau pure, acétonitrile (qualité chromatographique) et acide trifluoroacétique (qualité analytique).

Échantillons : étalons et échantillon de pipéridine fournis par l’utilisateur.

2. Méthodes et résultats

2.1 Conditions chromatographiques

Colonne : Phenomenex Kinetex® XB-C18, 5 μm, 4,6 × 250 mm.

Température de colonne : 35 °C. Débit : 1,0 mL/min. Volume d’injection : 10 μL.

Phase mobile A : solution aqueuse à 0,1 % de TFA. Phase mobile B : solution d’acétonitrile à 0,1 % de TFA.

Conditions de gradient :

Conditions CAD : CADetector a1 ; tube de dérive 50 °C ; gaz de nébulisation 3 L/min ; courant corona 1 μA ; gaz corona 1 L/min ; gain 0,2 ; RF 2,0.

2.2 Informations sur les échantillons

Le solvant blanc, l’étalon à 15 µg/mL, l’échantillon à tester et les niveaux d’étalon 10 %, 20 %, 30 %, 50 %, 80 %, 120 %, 150 % et 200 % ont été préparés. Les concentrations correspondantes étaient 1,5, 3,0, 4,5, 7,5, 12,0, 18,0, 22,5 et 30,0 µg/mL.

2.3 Résultats expérimentaux

2.3.1 Spécificité

Le solvant blanc n’a pas interféré avec le pic cible de la pipéridine, montrant une bonne spécificité.

2.3.2 Sensibilité

Pour l’échantillon au niveau de concentration 10 %, le rapport signal/bruit calculé par la méthode P2P du logiciel Agilent CDS était de 43,51, ce qui répond aux exigences de sensibilité.

Figure 1. Chromatogramme du blanc / diluant.

Figure 2. Étalon au niveau 10 % et résultat S/N.

2.3.3 Linéarité

Neuf niveaux de concentration d’étalons ont été injectés une fois chacun, et l’étalon a aussi été injecté à différents volumes d’injection. Les équations linéaires ont été établies à partir de la concentration en fonction de l’aire de pic et du volume d’injection en fonction de l’aire de pic. La linéarité en concentration a donné R²=0,9980 et la linéarité du volume d’injection R²=0,9995, indiquant une bonne linéarité.

2.3.4 Répétabilité

L’étalon a été injecté six fois consécutivement, puis le RSD% du temps de rétention, de l’aire de pic et de la hauteur de pic a été calculé. Le RSD du temps de rétention était de 0,184 %, le RSD de l’aire de pic de 1,38 % et le RSD de la hauteur de pic de 1,65 % ; toutes les valeurs étaient inférieures à 2,0 %, montrant une bonne répétabilité.

2.3.5 Essai de l’échantillon

Une injection de 10 μL de l’échantillon de pipéridine a donné un pic cible clair avec une aire de pic de 23,542. La concentration calculée à partir de la courbe d’étalonnage linéaire était de 2,9890 µg/mL.

Figure 3. Chromatogramme de répétabilité pour six injections de l’étalon.

Figure 4. Chromatogramme de l’échantillon, pleine échelle.

Figure 5. Chromatogramme de l’échantillon, vue agrandie.

1. Discussion expérimentale :
2. La méthode de référence utilise une colonne Waters T3. En raison des conditions disponibles, cet essai a évalué d’autres colonnes C18 et a finalement retenu une colonne Phenomenex Kinetex XB-C18. La méthode répondait globalement aux exigences expérimentales, même si la ligne de base près du pic cible était légèrement irrégulière.
3. L’expérience a évalué l’adéquation du CAD à l’échantillon selon la spécificité, la sensibilité, la linéarité et la répétabilité. Les résultats montrent une bonne sensibilité, linéarité et répétabilité du CAD et répondent aux besoins expérimentaux.