HPLC-CAD 피페리딘 시료 시험 보고서

1. 기기 및 재료

기기: Agilent 1200 액체 크로마토그래프와 Instrumax CADetector a1 하전 에어로졸 검출기(CAD).

시약: 순수, 아세토니트릴(크로마토그래피 등급), 트리플루오로아세트산(분석 등급).

시료: 사용자가 제공한 표준액 및 피페리딘 시료.

2. 방법 및 결과

2.1 크로마토그래피 조건

컬럼: Phenomenex Kinetex® XB-C18, 5 μm, 4.6 × 250 mm.

컬럼 온도: 35 °C. 유속: 1.0 mL/min. 주입량: 10 μL.

이동상 A: 0.1% TFA 수용액. 이동상 B: 0.1% TFA 아세토니트릴 용액.

기울기 조건:

CAD 조건: CADetector a1, 드리프트 튜브 50 °C, 분무 가스 3 L/min, 코로나 전류 1 μA, 코로나 가스 1 L/min, 게인 0.2, RF 2.0.

2.2 시료 정보

블랭크 용매, 15 µg/mL 표준액, 시험 시료 및 10%, 20%, 30%, 50%, 80%, 120%, 150%, 200% 표준 농도 수준을 준비했습니다. 해당 농도는 1.5, 3.0, 4.5, 7.5, 12.0, 18.0, 22.5, 30.0 µg/mL입니다.

2.3 실험 결과

2.3.1 특이성

블랭크 용매는 목표 피크인 피페리딘 측정에 간섭하지 않아 우수한 특이성을 보였습니다.

2.3.2 감도

10% 농도 수준 시료에서 Agilent CDS P2P 방식으로 계산한 신호대잡음비는 43.51로, 감도 요구사항을 충족했습니다.

그림 1. 블랭크 용매 / 희석액 크로마토그램.

그림 2. 10% 농도 수준 표준액 및 S/N 결과.

2.3.3 선형성

9개 농도 수준의 표준액을 각각 1회 주입하고, 표준액을 서로 다른 주입량으로도 주입했습니다. 농도와 피크 면적, 주입량과 피크 면적을 이용해 선형식을 작성했습니다. 농도 선형성은 R²=0.9980, 주입량 선형성은 R²=0.9995로 우수한 선형성을 보였습니다.

2.3.4 반복성

표준액을 6회 연속 주입하고 보유시간, 피크 면적 및 피크 높이의 RSD%를 계산했습니다. 보유시간 RSD는 0.184%, 피크 면적 RSD는 1.38%, 피크 높이 RSD는 1.65%였으며 모두 2.0% 미만으로 우수한 반복성을 보였습니다.

2.3.5 시료 시험

피페리딘 시료 10 μL 주입에서 목표 피크가 명확하게 검출되었고 피크 면적은 23.542였습니다. 선형 검량선으로 계산한 농도는 2.9890 µg/mL입니다.

그림 3. 표준액 6회 주입 반복성 크로마토그램.

그림 4. 시료 크로마토그램, 전체 스케일.

그림 5. 시료 크로마토그램, 확대 보기.

1. 실험 고찰:
2. 참고 방법은 Waters T3 컬럼을 사용합니다. 사용 가능한 조건의 제한으로 본 시험에서는 다른 C18 컬럼을 검토했고, 최종적으로 Phenomenex Kinetex XB-C18 컬럼을 선택했습니다. 이 방법은 실험 요구사항을 기본적으로 충족했지만, 목표 피크 부근의 베이스라인은 약간 고르지 않았습니다.
3. 본 실험은 특이성, 감도, 선형성 및 반복성 측면에서 시료에 대한 CAD 적용성을 평가했습니다. 결과는 CAD의 감도, 선형성 및 반복성이 우수하며 실험 요구를 충족함을 보여줍니다.