Rapport d’analyse HPLC-CAD de l’acide ursodésoxycholique

L’acide ursodésoxycholique (UDCA), chimiquement l’acide 3α,7β-dihydroxy-5β-cholestan-24-oïque, est un composé organique inodore et amer. En médecine, il est utilisé pour augmenter la sécrétion d’acides biliaires, modifier la composition de la bile, réduire le cholestérol et les esters de cholestérol dans la bile, et favoriser la dissolution progressive du cholestérol dans les calculs biliaires.

Numéro CAS : 128-13-2 ; numéro EINECS/CE : 204-879-3 ; masse moléculaire : 392.572.

Dans l’édition 2020 de la Pharmacopée chinoise, les substances apparentées de l’acide ursodésoxycholique sont examinées par chromatographie sur couche mince, tandis que le dosage/la teneur est déterminé par titrage. Cette application développe une méthode de détection par aérosol chargé afin d’améliorer la praticabilité, la répétabilité, la capacité de détection des impuretés et le soutien au contrôle qualité.

Le détecteur à aérosol chargé (CAD) est un détecteur quasi universel, sensible à la masse, adapté aux composés non volatils et semi-volatils. La réponse CAD n’est pas régie par la structure moléculaire, et l’analyte n’a pas besoin d’être ionisé. Dans des conditions comparables, des échantillons contenant la même masse absolue d’analyte donnent des réponses globalement comparables, ce qui favorise de faibles limites de détection et une sensibilité élevée.

1. Instruments et matériaux

Instrument : chromatographe liquide Agilent 1200 + détecteur à aérosol chargé Instrumax CADetector a1.

Réactifs : acétate d’ammonium, eau purifiée (Watsons distilled water), méthanol (qualité chromatographique), acide formique (qualité analytique).

Échantillons : UDA21 et UDP2451 fournis par le client ; UDP2451 est un produit brut.

2. Méthodes et résultats

2.1 Conditions chromatographiques

Colonne : ODS Hypersil 125 × 4 mm, 3 μm. Température de colonne : 40 °C. Débit : 0.8 mL/min.

Volume d’injection : 10 μL.

Phase mobile A : acétate d’ammonium 5 mmol/L + acide formique 0.1% dans l’eau. Phase mobile B : méthanol.

Conditions de gradient :

Rapports A/B : 40/60, 10/90, 10/90, 40/60, 40/60.

Conditions CAD : Instrumax CADetector a1 ; température du tube de dérive 40 °C ; débit de gaz de nébulisation 3 L/min ; courant corona/de charge 1 μA ; débit de gaz de charge 1 L/min.

2.2 Préparation des échantillons

Diluant : méthanol/phase mobile A (70:30).

Peser environ 20 mg d’échantillon dans une fiole jaugée de 10 mL, dissoudre avec le méthanol, puis porter au volume avec 70% de diluant pour obtenir environ 2 mg/mL.

Préparer l’échantillon témoin UDA21 à 1% à 20 μg/mL.

2.3 Résultats expérimentaux

Remarque : chaque échantillon comporte un agrandissement local du chromatogramme.

La réponse CAD des échantillons UDA21 et UDP2451 a été évaluée dans les conditions HPLC-CAD ci-dessus. Les chromatogrammes montrent que l’acide ursodésoxycholique et les signaux d’impuretés associées peuvent être observés clairement.

Les détails chromatographiques de UDP2451 et du produit brut soutiennent l’évaluation de la méthode et le suivi des impuretés.

Les chromatogrammes superposés et agrandis fournissent des preuves complémentaires du comportement de réponse et de la capacité de détection des impuretés.

Les données chromatographiques montrent une réponse pratique pour l’acide ursodésoxycholique et les pics d’impuretés associées sous détection CAD.

3. Conclusion

Le CAD a donné une bonne réponse pour l’acide ursodésoxycholique, et les impuretés ont été efficacement détectées.

Le détecteur CAD peut fournir des données pour l’optimisation du procédé et le contrôle qualité de l’acide ursodésoxycholique. La méthode HPLC-CAD est simple, spécifique et sensible, et peut être utilisée pour le contrôle qualité et l’évaluation de l’acide ursodésoxycholique.