HPLC-CAD-Analyse von Ursodeoxycholsäure

Ursodeoxycholsäure (UDCA), chemisch 3α,7β-Dihydroxy-5β-cholestan-24-säure, ist eine geruchlose, bitter schmeckende organische Verbindung. Medizinisch wird sie eingesetzt, um die Gallensäuresekretion zu erhöhen, die Zusammensetzung der Galle zu verändern, Cholesterin und Cholesterinester in der Galle zu senken und die allmähliche Auflösung von Cholesterin in Gallensteinen zu unterstützen.

CAS-Nummer: 128-13-2; EINECS/EG-Nummer: 204-879-3; Molekulargewicht: 392.572.

Im Chinesischen Arzneibuch 2020 werden verwandte Substanzen der Ursodeoxycholsäure mittels Dünnschichtchromatographie untersucht, während die Gehaltsbestimmung titrimetrisch erfolgt. Diese Anwendung entwickelt eine Methode mit Charged-Aerosol-Detektion, um Praxistauglichkeit, Wiederholbarkeit, Verunreinigungsdetektion und Qualitätskontrolle zu verbessern.

Ein Charged-Aerosol-Detektor (CAD) ist ein nahezu universeller, massensensitiver Detektor für nichtflüchtige und semiflüchtige Analyten. Das CAD-Ansprechsignal wird nicht primär durch die Molekülstruktur bestimmt, und der Analyt muss nicht ionisiert werden. Unter vergleichbaren Bedingungen liefern Proben mit gleicher absoluter Analytmasse weitgehend vergleichbare Signale und unterstützen niedrige Nachweisgrenzen sowie hohe Empfindlichkeit.

1. Instrumente und Materialien

Instrument: Agilent 1200 Flüssigchromatograph + Instrumax CADetector a1 Charged-Aerosol-Detektor.

Reagenzien: Ammoniumacetat, gereinigtes Wasser (Watsons distilled water), Methanol (Chromatographiequalität), Ameisensäure (Analysequalität).

Proben: vom Kunden bereitgestellte UDA21 und UDP2451; UDP2451 ist ein Rohprodukt.

2. Methoden und Ergebnisse

2.1 Chromatographische Bedingungen

Säule: ODS Hypersil 125 × 4 mm, 3 μm. Säulentemperatur: 40 °C. Flussrate: 0.8 mL/min.

Injektionsvolumen: 10 μL.

Mobile Phase A: 5 mmol/L Ammoniumacetat + 0.1% Ameisensäure in Wasser. Mobile Phase B: Methanol.

Gradientenbedingungen:

A/B-Verhältnisse: 40/60, 10/90, 10/90, 40/60, 40/60.

CAD-Bedingungen: Instrumax CADetector a1; Driftrohrtemperatur 40 °C; Zerstäubergasstrom 3 L/min; Korona-/Ladestrom 1 μA; Ladegasstrom 1 L/min.

2.2 Probenvorbereitung

Verdünnungsmittel: Methanol/mobile Phase A (70:30).

Etwa 20 mg Probe in einen 10 mL Messkolben einwiegen, mit Methanol lösen und mit 70% Verdünnungsmittel bis zur Marke auffüllen, um etwa 2 mg/mL zu erhalten.

UDA21 als 1%-Kontrollprobe mit 20 μg/mL herstellen.

2.3 Experimentelle Ergebnisse

Hinweis: Zu jeder Probe ist ein vergrößerter Chromatogrammausschnitt enthalten.

Das CAD-Ansprechsignal der Proben UDA21 und UDP2451 wurde unter den oben genannten HPLC-CAD-Bedingungen bewertet. Die Chromatogramme zeigen, dass Ursodeoxycholsäure und zugehörige Verunreinigungssignale klar beobachtet werden können.

Die Chromatogrammdetails von UDP2451 und der Rohproduktprobe unterstützen die Methodenbewertung und Verunreinigungsüberwachung.

Überlagerte und vergrößerte Chromatogramme liefern zusätzliche Hinweise auf das Ansprechverhalten und die Fähigkeit zur Verunreinigungsdetektion.

Die chromatographischen Daten zeigen ein praxistaugliches Ansprechsignal für Ursodeoxycholsäure und zugehörige Verunreinigungspeaks unter CAD-Detektion.

3. Fazit

CAD zeigte ein gutes Ansprechsignal für Ursodeoxycholsäure, und Verunreinigungen wurden wirksam detektiert.

Der CAD-Detektor kann Daten für Prozessoptimierung und Qualitätskontrolle von Ursodeoxycholsäure bereitstellen. Die HPLC-CAD-Methode ist einfach, spezifisch und empfindlich und kann für Qualitätskontrolle und Bewertung von Ursodeoxycholsäure eingesetzt werden.