토브라마이신 정량을 위한 HPLC-CAD 응용 노트
Instrumax (Tianjin) Co., Ltd.Instrumax (Tianjin) Co., Ltd.1. 서문
토브라마이신은 아미노글리코사이드계 항생제입니다. 아미노글리코사이드계 항생제는 공액 구조가 없고 UV 흡수가 약하므로 일반적인 직접 UV 검출에는 적합하지 않습니다.
2020년판 중국약전에서는 토브라마이신 원료 관련 물질 시험에 ELSD를 사용하고, 함량 시험에는 미생물 정량법을 사용합니다. 현행 USP 기준은 관련 물질에 박층 크로마토그래피를, 함량 시험에 유도체화 후 UV 검출을 사용합니다. 미국약전위원회는 2023년 1월 HPLC-CAD 방법을 제안하는 의견수렴 초안을 발표했습니다.
본 응용 노트는 Instrumax CAD와 Agilent ZORBAX SB-C18 컬럼을 사용한 토브라마이신 정량 방법을 평가했습니다. 이 방법은 높은 특이성, 감도, 반복성 및 선형성을 보입니다.
Instrumax (Tianjin) Co., Ltd.2. 기기 및 재료
기기: Agilent 1200 액체 크로마토그래프 + Instrumax CADetector a1 하전 에어로졸 검출기.
시약: 순수(Watson’s distilled water), 아세토니트릴(크로마토그래피 등급), 트리플루오로아세트산(분석 등급). 시료: 토브라마이신.
3. 방법 및 결과
3.1 크로마토그래피 조건
컬럼: Agilent ZORBAX SB-C18, 4.6 mm × 250 mm, 3.5 μm. 컬럼 온도: 10 °C. 유속: 0.8 mL/min. 주입량: 25 μL.
이동상 A: 0.3% TFA 수용액. 이동상 B: 0.3% TFA 아세토니트릴 용액. 그라디언트 용리.
CAD 조건: 드리프트 튜브 온도 40 °C, 분무 가스 유량 3 L/min, 코로나 전류 1 μA, 코로나 가스 유량 1 L/min, 게인 0.2.
Instrumax (Tianjin) Co., Ltd.3.2 시료 조제
블랭크 용매: 이동상 A. 토브라마이신 표준품 원액: 180.0 μg/mL.
선형성 용액: 10.8, 14.4, 18.0, 21.6, 27.0 μg/mL.
3.3 특이성
블랭크는 주피크 측정을 방해하지 않아 특이성이 좋았습니다.
그림 1. 블랭크 그라디언트(미주입). 그림 2. 블랭크 용매(이동상 A). 그림 3. 180.0 μg/mL 토브라마이신 표준품 원액.
Instrumax (Tianjin) Co., Ltd.3.4 이론단수 및 주입 정밀도
10.8 μg/mL 선형성 용액 1에서 USP 이론단수는 16600.5(>3000)로 컬럼 성능이 양호했습니다.
18.0 μg/mL 표준용액을 5회 연속 주입한 결과 피크 면적 RSD는 0.980%(<2.0%)로 정밀도가 좋았습니다.
Instrumax (Tianjin) Co., Ltd.3.5 선형성
선형성 용액 1부터 5까지 각각 1회 주입하고, 용액 농도와 피크 면적으로 선형 회귀를 수행했습니다. 선형 상관계수는 R = 0.99918(>0.995)로 양호한 선형성을 보였습니다.
Instrumax (Tianjin) Co., Ltd.4. 고찰 및 결론
블랭크 그라디언트에는 15–16 min에 그라디언트 피크가 있었지만 실험에는 영향이 없었습니다. 블랭크 용매에는 2–5 min에 4개의 피크가 있었으나 토브라마이신 주피크의 머무름 시간과 충분히 떨어져 있어 검출을 방해하지 않았습니다.
결과적으로 Instrumax CAD는 토브라마이신 시료에 대해 우수한 검출, 반복성 및 선형성을 제공하며, 방법 평가와 품질 관리 요구를 충족합니다.
참고문헌: USP-NF 의견수렴 초안 Tobramycin [S].
