英迈 CAD-妥布霉素含量测定-应用简报
英迈仪器（天津）有限公司英迈仪器（天津）有限公司1、前言
电喷雾检测器(charged aerosol detector，CAD)是最近几年发展起来的一种新型通用型检测器，它的检测与被测物质的分子结构无关，被测物质也不需要被电离，只要被测物质属于半挥发性或不挥发性化合物就可以采用CAD 检测。同时，CAD 是一种质量敏感型检测器，被测物质响应值大小由所检测样品的质量决定，只要所检测样品的质量一致，其测得的响应值基本趋于相同，并且能得到较低的检测限和较高灵敏度。
电雾式检测器（CAD）是英迈仪器研发团队经过多年潜心研究和反复实验所取得的重大科技成果。该检测器采用先进的电与雾化技术，可以实现对微量样品的高灵敏度、高精度检测。
妥布霉素（Tobramycin）别名托普霉素，是一种氨基糖苷类抗生素。氨基糖苷类抗生素不含共轭结构，紫外吸收较弱，不适合直接利用紫外检测器的常规方法分析。2020版《中国药典》妥布霉素原料有关物质检测采用蒸发光散射检测器（ELSD），ELSD与CAD相比灵敏度低，重复性差；含量检测项使用微生物检定法，方法专属性较差。《USP》现行标准中妥布霉素的有关物质检测是采用薄层色谱法，无法对各杂质进行深入分析；含量检测方法是样品衍生化处理后通过紫外检测器检测，操作比较繁琐。为此美国药典委员会于2023年1月发布的征求意见稿[1]，采用HPLC-CAD方法检测妥布霉素的有关物质和含量。
本文参考征求意见稿方法，采用英迈仪器CAD结合安捷伦SB-C18柱对妥布霉素含量测定方法进行考察，本方法专属性强、灵敏度高、重复性好，线性佳，能够满足妥布霉素原料及相关制剂的质量控制需求。
2、仪器和材料
仪器：Agilent1200液相色谱仪+CAD检测器（英迈仪器，型号：CADetector a1）
试剂：纯水（屈臣氏蒸馏水），乙腈（色谱纯），三氟乙酸（分析纯）
样品：妥布霉素样品（用户老师友情提供）
3、方法与结果
2.1 色谱条件
英迈仪器（天津）有限公司色谱柱：Agilent ZORBAX SB C18，4.6mmx250mm，3.5μm
柱温：10℃ 流速：0.8mL/min
进样量：25μL
流动相A：0.3%TFA水溶液 流动相B：0.3%TFA乙腈溶液
梯度洗脱
CAD条件：
仪器型号：英迈仪器 CADetector a1
漂移管温度：40℃ 雾化气流：3L/min
电晕电流：1μA 电晕气流：1L/min
增益：0.2
2.2 样品制备
（1）空白溶剂：流动相A
（2）对照溶液-即原料配制的样品溶液
对照品储备液：取妥布霉素对照品约 18mg（0.018g），精密称定，置100m1量瓶中，加稀释剂（流动相A）约10ml使溶解并稀释至刻度，摇匀即得。浓度为180.0μg/mL
线性溶液1：精密量取含量对照品储备液 3ml，置 50m1量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀即得。浓度为10.8μg/mL
线性溶液2：精密量取含量对照品储备液 2ml，置 25m1量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀即得。浓度为14.4μg/mL
线性溶液3：精密量取含量对照品储备液 1m1，置 10m1量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀即得。浓度为18.0μg/mL
线性溶液4：精密量取含量对照品储备液 3ml，置 25m1量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀即得。浓度为21.6μg/mL
线性溶液5：精密量取含量对照品储备液 3ml，置 20m1量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀即得。浓度为27.0μg/mL
英迈仪器（天津）有限公司2.3 实验结果
2.3.1 专属性
空白不干扰主峰测定，专属性良好。
图1 空白梯度（未进样）
图2 空白溶剂（流动相A）
图3 妥布霉素对照储备液180μg/mL图
英迈仪器（天津）有限公司2.3.1 线性溶液1-理论板数
线性溶液1（浓度为10.8μg/mL），计算理论板数（USP），理论板数为16600.5（＞3000），色谱柱性能良好。
图4 妥布霉素对照品线性溶液1（10.8μg/mL）图
2.3.2 对照品进样精密度
浓度为18.0μg/mL的对照品溶液，连续进样5针，峰面积RSD%为0.980%（＜2.0%），精密度良好。
英迈仪器（天津）有限公司2.3.3 对照品溶液线性
线性溶液1至线性溶液5，分别进样1针，以线性溶液浓度与峰面积作线性回归方程。
结果显示线性相关系数R为0.99918（＞0.995），线性良好。
英迈仪器（天津）有限公司- 实验讨论：
- 由实验结果可知，空白梯度在15~16min有梯度峰，对实验无影响；空白溶剂在2~5min有4个峰，由于其与妥布霉素主峰保留时间相差较远，不干扰检测，故本次实验未做进一步排查与考察。
- 本实验从专属性、原料进样精密度、线性、制剂样品、制剂进样精密度等几个方面考察英迈CAD对样品的适用性，结果表明，英迈CAD样品检出、重复性、线性等结果良好，能够满足实验需求。
参考文献[1] USP-NF Draft for comments Tobramycin [S].